Quantitative Analyses of Poliovirus in Seawater and Sewage Using a Competitive Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction Method

反向轉錄酶及聚合酶連鎖反應(RT-PCR)已經很廣泛的用來測定環境中的樣本是否含有entnc vlruses。利用RT-PCR的優點有高靈敏度的檢測性和快速的報導性。與傳統式的細胞培養相較，RT-PCR並不能使我們得知病毒的數目和感染性有無。在研究過程中，我們發展了一種可定量的RT-PCR方法來測定環境中病毒的數目。我們利用遺傳工程的方法設計了一個RNA內定標準，並將它用於RT-PCR的反應中來測定小兒麻痺病毒的數目。經由連續稀釋過的RNA內定標準模板被混在含有6-FAM標示過的polio 3'(下游)端基因引子和polio 5'(上游)端未標示過的基因引子的RT-PCR反應溶液中，DNA定序儀被用來定量經由反應後RT-PCR產品所發出的螢光。在RT-PCR反應中內定標準和小兒麻痺病毒的量同時被放大，而可被用來估定在海水和污水樣本中所含此種病毒的數目。這種利用內定標準和特定基因引子的PCR方法可被引用於定量在環境中某些特定的微生物。