利用PCR與RFLP技術分析臺灣產南方靈芝兩雜交不孕性群之遺傳變異

本報告在以聚合酵素鏈反應(PCR)及限制片段長度多型性(RFLP)等分子生物的技術，探討台灣產南方靈芝Ganoderma allstrale (Fr.) Pat稜內兩個「雜交不孕性群」(intersterility group)之遺傳變異，同時加入美國產的G. allstrale FL-01作為比較研究。另以台灣產的新日本靈芝G. neo-japonicum Imaz. CCRC 36049當做本研究之外群(out group)。以互補於酵母菌rRNA基因的引子與DNA聚令酵素，將2.16- Kb的17SrRNA基因片段及1.85-Kb的25S rRNA基因5端片段選殖出來。依據限制酵素AvaII、HhaI、HinfI切割PCR產物及多聚丙烯醯膠體電泳，分析各靈芝菌種的限制表限型(restriction phenotype)：台灣產南方靈芝的兩個雜交不孕性群呈現遺傳上的變異，可以AvaII及HinfI的限制表現型區別；美國產的南方靈芝部分rDNA重覆單位(rDNA repeat)出現序列異質性(sequence heterogeneity)。以限制酵素部分切割(partial digest)及南方墨點法(Southern blot)建築的限制酵素圖譜(restriction map)，呈現各靈芝菌種保守和變異的限制酵素切點。將這些酵素切點利用PAUP軟體繪出親緣關係樹狀圖，結果顯示台灣產南方靈芝兩群已明顯分化。