以巢式複合即時PCR技術檢測肺炎黴漿菌抗藥性菌株

Detection of Macrolide Resistance Strain of Mycoplasma Pneumoniae by a Novel Nested Duplex Real-Time PCR Assay

肺炎黴漿菌(Mycoplasma pneumoniae)為引發原發性非典型肺炎(CAP， community-acquired pneumonia)的主因之一，治療肺炎黴漿菌感染的藥物通常為巨環類抗生素(macrolide antibiotics,ML)，此菌株23S rRNA基因某些位點產生單點突變時，會對巨環類抗生素產生不同程度之抗藥性，其中A2063G及A2064G為最常見且會導致用藥無效的突變位點，影響臨床藥物治療之成效。許多文獻顯示各國感染肺炎黴漿菌抗藥性菌株的比例逐年增加，但傳統藥物敏感性檢測方法費工耗時，目前尚無敏感度高、快速的分子檢驗技術可直接檢測臨床檢體是否有抗藥性。因此本研究之目的乃建立快速且高敏感度的巢式複合即時PCR (Nested Duplex Real-time PCR)檢測技術，針對多種抗藥性位點設計高專一性之雙重螢光探針，用以區分抗藥性菌株及非抗藥性菌株。研究結果顯示，此系統不需經過培養，可以直接從臨床檢體中檢測肺炎黴漿菌及抗藥性基因位點，抗藥性菌株及非抗藥性菌株之敏感度皆可達1 copy/μL。我們分析76例已確診為肺炎黴漿菌感染案例，結果顯示巢式複合即時PCR可以檢測出23例抗藥性菌株、53例非抗藥性菌株，而傳統基因定序則僅鑑定出20例抗藥性菌株、49例非抗藥性菌株。我們更進一步檢測2010年6月至2012年5月肺炎黴漿菌感染之臨床檢體共181例，其中6.6%(31/181)為抗藥性菌株，包含1例A2063C、1例A2064G及29例A2063G，且抗藥性菌株數量有上升的趨勢。因此，使用此快速且高敏感度之抗藥性菌株鑑定技術，不但能提供臨床治療參考之訊息，而且可以用來進行台灣地區流行病學之分析調查。