用 MDCK、MK-2 與 HEp-2 混合細胞，建構便宜快速的呼吸道病毒分離培養方法

Rapid Isolation of Respiratory Viruses Using Cost-effective Simultaneous Culture of MDCK, MK-2 and HEp-2 Cells

當今，病毒實驗室的病毒分離培養方法（virus isolation）不外乎有兩種：（一）以傳統細胞培養管（conventional cell culture tubes）來培養病毒，此法之病毒與細胞感受性（cell susceptibility）雖好，但費工耗時；（二）使用市售呼吸道混合冷凍細胞（commercial R-mix frozen cells），這個方法可縮短培養時間，但成本頗高。上述方法皆有著顧此失彼之憾，因此引起我們的興趣去找尋一種正確、快速又省錢的病毒培養方式。在考慮人力及材料取得便利性，本研究我們使用三種傳統細胞株，包括MDCK細胞株（對流行性感冒病毒感受性佳）、MK-2細胞株（對副流行性感冒病毒、人類間質肺炎病毒及流行性感冒病毒感受性佳）及HEp-2細胞株（對呼吸道融合病毒及腺病毒感受性佳），以不同比例之細胞量於內置有直徑10 mm圓形玻片之3-mL無菌塑膠小瓶（vials）混合培養三~四天，形成MDCK、MK-2與HEp-2混合培養細胞（culture of MDCK, MK-2 and HEp-2 cells ; CoMMH），利用保存於-75℃ 386支呼吸道病毒陽性剩餘檢體進行接種，培養4天後鑑定。結果顯示，呼吸道病毒分離率為55.0% （213株陽性病毒中有95株A型流行性感冒病毒、49株腺病毒、10株呼吸道融合病毒及59株其他呼吸道病毒），而以市售呼吸道混合冷凍細胞培養4天之分離率為39.3% （152株陽性病毒中有56株A型流行性感冒病毒、32株腺病毒、9株呼吸道融合病毒及55株其他呼吸道病毒），所以或許我們可以利用CoMMH混合細胞來建構一種較便宜且快速的病毒培養方法。

Nowadays, diagnostic virology laboratories isolate respiratory viruses predominantly in traditional tube and commercial R-mix frozen cell cultures. The traditional tube culture is generally sensitive but a time-consuming procedure. Nevertheless, the commercial R-mix frozen cell (R-mix) culture is faster for virus isolation but not cost-effective. How to establish a method for accurate, rapid and cost-saving isolation of respiratory viruses is important. We retrospectively used 386 virus-positive samples to test detection rates of shell viral (SV) assays with simultaneous culture of MDCK, MK-2 and HEp-2 cells (CoMMH) and the R-mix culture. A total of 55.0% of the strains (213 strains; 95 influenza type A viruses, 49 adenoviruses, 10 respiratory syncytial viruses and 59 other viruses) were detected by the CoMMH SV assay in 4 days, whereas 39.3% of the strains (152 strains; 56 influenza type A viruses, 32 adenoviruses, 9 respiratory syncytial viruses and 55 other viruses) were detected by R-mix in a mean time of 4 days. The CoMMH SV assay may be useful for the acute and rapid detection of respiratory viruses.