Ciprofloxacin藥物酵素連結免疫吸附法殘留檢驗試劑之開發

Development of the Enzyme-linked Immunosorbent Assay Residual Detection Kit for Ciprofloxacin

本研究目的在於開發直接競爭型酵素連結免疫吸附法，期能精確、簡單及快速檢測禽畜水產品中ciprofloxacin (Cipro)殘留之檢測試劑。實驗結果顯示利用N-hydroxysuccinimide ester法可成功製備Cipro-human serum albumin (HSA)之結合蛋白，同時以相同的方法可以分別成功製備出藥物-bovine serum albumin結合蛋白和藥物-horseradish peroxidase之結合體。另外，利用高效液相層析法(high performance liquid chromatography)搭配紫外光和螢光檢測器可以檢測藥物-HSA結合體。運用所製備之Cipro-HSA之結合蛋白以皮下免疫紐西蘭白兔六次後，可成功誘導產生多株抗體，力價高達65,536倍以上。收集多株抗體並製備成直接競爭型ELISA盤後，在磷酸緩衝液 (PBS)中的最低檢測極限為0.78 ppb，而在牛奶、fetal bovine serum、吳郭魚肉、豬肉、雞肉、蝦肉及牛肉中分別為1.08 ppb、1.37 ppb、0.83 ppb、1.1 ppb、0.88 ppb、1.32 ppb 及1.14 ppb，故所開發試劑的敏感度相當高，未來應可用於臨床Cipro殘留之檢測。在精確度方面，Cipro檢測盤之組內(intra-assay)與組間 (inter-assay)檢測變異值分別為5.82％和7.38％，顯示Cipro檢測盤精確度高。此外，本檢測盤對enrofloxacin和norfloxacin有較高的反應率外，對其餘抗菌劑皆小於0.2％。