建立高重組蛋白表達之酵母菌Pichia pastoris 系統

利用真核表現系統來製造生產重組蛋白質已被廣泛應用於醫藥、食品與化學工業等方面，嗜甲醇酵母菌Pichia pastoris 是目前最常被用來大量表達重組蛋白質的真核表達系統，但由於不同外源基因在P. pastoris 中經常會有不同的重組蛋白質表達量，為了要建立一個能穩定且大量表達重組蛋白質的系統，有許多研究報告提出增加外源基因在P. pastoris 表達量的方法。本研究採用操縱細胞整體轉錄作用 (global transcription machinery engineering) 的技術，以提升Candida rugosa 重組脂肪酶在P. pastoris 的表達量，藉由隨機突變P. pastoris 的重要轉錄因子SPT15 (一種TATA-bindingprotein)，達到改變P. pastoris 的轉錄體(transcriptome)，進而影響Candida rugosa 重組脂肪酶(lipase)的表達量。利用高通量(high-throughput)脂肪酶活性測定法，挑出具有高脂肪酶表達量的突變株。目前已從464 個突變株當中，篩選出16 個突變株其脂肪酶表達量高於野生型1.5 倍以上，其中最高的一株表達量為野生型的2.3 倍。此結果顯示操縱P. pastoris 整體轉錄作用可以提升外源重組蛋白在P. pastoris 的表達量。